Il y a onze personnages jouables dans The Binding of Isaac: Rebirth. Cinq de ces personnages (Isaac, Magdalene, Cain, Judas et ??? / Blue Baby) viennent de l'original The Binding of Isaac, ainsi que deux personnages additionnels (Eve et Samson) ont été ajoutés plus tard. Eve a été ajoutée durant la mise à jour Halloween de The Binding of Isaac, alors que Samson a été ajouté dans l'extension The Wrath of the Lamb. Rebirth contient quatre nouveaux personnages (Eden, Lazarus, Azazel). Chaques personnages commencent avec différents Attributs et abilités qui leurs donnent leurs styles de jeu.
Isaac
Isaac est le personnage principal de la série, et il est le seul personnage qui peut être joué sans être débloquer en premier. Isaac apparaît dans l'original The Binding of Isaac. Ces attributs sont 3/2/2 (3 Cœurs / 2 Vitesse / 2 Dégâts) et il commence avec 1 bombe.
Magdalene
Magdalene, ou Maggy, est débloquée lorsque le joueur possède sept ou plus de cœurs en une seule partie. Magdalene apparaît dans l'original The Binding of Isaac. Magdalene commence avec le Yum Heart, qui est un actif. Ses attributs sont 4/1/2 (4 Cœurs / 1 Vitesse / 2 Dégâts).
Cain
Cain est débloqué lorsque le joueur possède 55 ou plus de pennies en une seule partie. Cain apparaît dans l'original The Binding of Isaac. Il commence avec l'objet passif Lucky Foot. Alors que dans le jeu original cette objet était puissant dû à l'enlèvement de toutes les pillules à effets négatifs, il réduit désormais la chance d'en obtenir.
Judas
Judas est débloqué lorsque le joueur bat Satan pour la première fois. Judas apparaît dans l'original The Binding of Isaac. Judas commence avec seulement un seul cœur, mais il possède aussi le Book of Belial au début ainsi que 3 de dégâts.
Eve
Eve est débloquée lorsque le joueur passe deux étages à la suite sans récupérer de cœurs. Eve est apparue dans l'original The Binding of Isaac, originellement ajoutée lors de la mise à jour Halloween. Elle commence avec le Dead Bird et le Whore of Babylon.
Samson
Samson est débloqué lorsque le joueur passe deux étages à la suite sans prendre de dégâts (toutefois, consommer des cœurs chez Satan ne comptent pas). Samson est apparu dans l'extension Wrath of the Lamb. Contrairement au jeu original, Samson commence avec 3 cœurs, au lieu de 1 cœur et 1 cœur d'âme. À chaque fois que Samson prend des dégâts il reçoit un bonus de puissance augmentant son attaque qui se réinitialise lorsqu'il passe à l'étage suivant.
???
???, ou Blue Baby, est débloqué lorsque le joueur bat Mom's Heart dix fois. ??? apparaît dans l'original The Binding of Isaac.
Eden
Eden est débloqué lorsque le joueur bat The Womb pour la première fois. Eden est un nouveau personnage dans The Binding of Isaac: Rebirth. À chaque fois que vous battez Mom's Heart, vous aurez un jeton Eden. Eden est un personnage aléatoire en lui-même, à chaque partie, il aura une différente coiffure, différents objets, et de différents attributs. Selon Edmund, dans ce sujet [1] sur le blog des mises à jour de The Binding of Isaac: Rebirth sur lequel il travaille, Eden n'est ni une femme ni un homme.
Lazarus
Lazarus est débloqué lorsque le joueur possède quatre ou plus de cœurs d'âmes dans une seule partie. Il est un nouveau personnage de The Binding of Isaac: Rebirth. Il a les mêmes attributs que Isaac : 3/2/2 (3 Cœurs / 2 Vitesse / 2 Dégâts) mais aussi 1 vie en plus ainsi qu'une pillule au début de la partie. Lorsqu'il réapparaît en utilisant sa nouvelle vie de base, Lazarus a l'objet passif Anemic, lui faisant une trainée de sang toxique derrière lui après avoir reçu des dégâts. Ceci se réinitialise lorsqu'il quitte la salle. À remarquer que contrairement aux autres objets causant le joueur à réapparaître, lorsque Lazarus réapparaît, il renaît là où il est mort, et non dans pas dans la dernière salle avant la mort.
Azazel
Azazel est débloqué lorsque le joueur fait trois pactes avec le Diable dans une seule partie. Il est un nouveau personnage dans The Binding of Isaac: Rebirth. Il commence avec une version à courte portée de la Brimstone, 3 [[Ressources#Cœur|Cœurs Noirs, 0 - The Fool, ainsi que l'abilité de voler, mais il ne possède pas de cœur simple, sauf qu'il peut toujours en obtenir. Azazel souffrant de la plus courte portée entre tous les personnages, il est équilibré avec le pouvoir de voler, l'ajout de sa puissance par coup via son attaque du type Brimstone, et de dégâts significatifs à tous les ennemies dans la salle lors de la perte d'un Cœur Noir, tuant la plupart des plus faibles ennemies.
Informations confirmées sur les nouveaux personnages
- Eden commence au hasard, ainsi que des Attributs équilibré et deux objets au hasard. Pour jouer en tant qu'Eden, un jeton doit être payé, qui peut être gagné en battant Mom's Heart.
- Il sera possible de choisir différents objets de départ pour les différents personnages, avec un subtil changement visuel.
- Ed a écrit une idée pour un possible personnage jouable pour Rebirth pour les fans de Loki qu'ils aimeront. (Ce personnage semble être Azazel).
- Edmund a dit qu'il voulait équilibrer les personnages, mais pas au niveau des attributs. Certains personnages étant plus durs à jouer est supposé être intégrant au jeu.
- Ed a déclaré à plusieurs reprises (avec la re-confirmation le 16 Septembre 2014) que Rebirth contiendra un personnage plus à la mêlée (il est probable que ce soit Azazel).
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